Roche 11365177001羅氏試劑N-Glycosidase用戶指南

摘要：本指南聚焦于Roche 11365177001羅氏試劑N-Glycosidase，旨在為科研人員提供全面且易懂的使用指引。詳細(xì)介紹了產(chǎn)品基本信息、特性、作用機(jī)制、應(yīng)用場(chǎng)景、操作流程、注意事項(xiàng)以及性能參數(shù)等內(nèi)容，助力科研人員高效、準(zhǔn)確地開(kāi)展糖基化蛋白質(zhì)分析相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
關(guān)鍵詞：Roche 11365177001；N-Glycosidase；糖基化蛋白質(zhì)分析；用戶指南

一、引言

在生物醫(yī)學(xué)研究的廣闊領(lǐng)域中，糖基化蛋白質(zhì)分析占據(jù)著舉足輕重的地位。糖基化作為蛋白質(zhì)最常見(jiàn)的翻譯后修飾之一，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能和定位有著深遠(yuǎn)影響，與眾多生理和病理過(guò)程密切相關(guān)。Roche 11365177001羅氏試劑N-Glycosidase憑借其性能，成為糖基化蛋白質(zhì)分析的得力工具。本文將詳細(xì)介紹該試劑的相關(guān)信息，以幫助科研人員更好地利用它開(kāi)展研究工作。

二、產(chǎn)品概述

（一）基本信息

• 品牌：Roche/羅氏

• 產(chǎn)品名稱(chēng)：N-Glycosidase F

• 貨號(hào)：11365177001

• 規(guī)格：250 U（0.25 ml）

• 儲(chǔ)存溫度：?20°C

• 最佳pH：7.0 - 8.0

• 質(zhì)量水平：100

• 純度測(cè)定：≥90%（SDS-PAGE）

• 比活性：約25000 units/mg protein

（二）化學(xué)性質(zhì)

N-Glycosidase F是一種肽-N-糖苷酶 F，也被稱(chēng)為肽-N 4-(乙酰-β-氨基葡萄糖)-天冬酰胺酰胺酶。它可溶于50 mM磷酸鈉、含12.5 mM EDTA、50%甘油（v/v）的溶液中，pH為7.2。

三、產(chǎn)品特性

（一）高特異性

N-Glycosidase F能夠特異性識(shí)別并去除N-連接糖基化蛋白質(zhì)的GlcNAc殘基，不會(huì)對(duì)其他類(lèi)型的糖基化或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成影響。這種高特異性確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，使得科研人員能夠?qū)Ｗ⒂谘芯縉-連接糖基化蛋白質(zhì)的相關(guān)特性。

（二）高活性

羅氏采用的酶穩(wěn)定技術(shù)，使N-Glycosidase F在較寬的溫度和pH范圍內(nèi)保持高活性。同時(shí)，其快速的反應(yīng)速度大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期，提高了科研效率。例如，一個(gè)單位的酶活性是在pH 7.8、37°C下1分鐘內(nèi)水解1 nmol二甲氨基偶氮苯甲酰纖維蛋白糖肽或0.2 nmol丹磺酰胎球蛋白糖肽。

（三）高純度

通過(guò)嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制，N-Glycosidase F的純度高達(dá)99%以上，有效避免了雜質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。高純度的試劑能夠提供更清晰、更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為科研人員的深入研究奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

（四）方便易用

該試劑采用即用型設(shè)計(jì)，無(wú)需復(fù)雜的預(yù)處理步驟，直接加入樣品中即可開(kāi)始反應(yīng)。同時(shí)，羅氏還提供了詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指南和技術(shù)支持，確保用戶能夠輕松上手，順利開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

四、作用機(jī)制

N-Glycosidase F能夠切割所有類(lèi)型的天冬酰胺結(jié)合N-聚糖，前提是氨基和羧基以肽鍵連接，并且寡糖具有最小長(zhǎng)度的殼二糖核心單位。其反應(yīng)產(chǎn)物為氨、天冬氨酸（肽鏈中）和完整的寡糖。通過(guò)這種作用機(jī)制，N-Glycosidase F可以將糖基化位點(diǎn)暴露出來(lái)，為后續(xù)的質(zhì)譜分析、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)提供重要幫助。

五、應(yīng)用場(chǎng)景

（一）糖基化蛋白質(zhì)功能研究

在研究糖基化蛋白質(zhì)在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、蛋白質(zhì)相互作用等方面的功能時(shí)，N-Glycosidase F。通過(guò)去除糖基化修飾，科研人員可以觀察蛋白質(zhì)功能的變化，深入了解糖基化在蛋白質(zhì)功能調(diào)控中的作用機(jī)制。

（二）藥物研發(fā)

在藥物研發(fā)領(lǐng)域，N-Glycosidase F可用于分析藥物與糖基化蛋白質(zhì)的相互作用。例如，研究藥物是否會(huì)影響糖基化蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，以及藥物與糖基化蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)等。這些研究為藥物作用機(jī)理的研究提供了有力支持，有助于開(kāi)發(fā)更有效的藥物。

（三）疾病機(jī)制研究

許多疾病的發(fā)生與發(fā)展與糖基化蛋白質(zhì)的異常表達(dá)或修飾密切相關(guān)。N-Glycosidase F可以幫助科研人員分析疾病狀態(tài)下糖基化蛋白質(zhì)的變化，揭示疾病的發(fā)生機(jī)制，為疾病的診斷和治療提供新的思路和方法。

六、操作流程

（一）準(zhǔn)備工作

從?20°C冰箱中取出N-Glycosidase F試劑，放置在冰上緩慢解凍。準(zhǔn)備待處理的糖基化蛋白質(zhì)樣品，確保樣品的質(zhì)量和濃度符合實(shí)驗(yàn)要求。同時(shí)，準(zhǔn)備好所需的緩沖液、離心管、移液器等實(shí)驗(yàn)器材。

（二）樣品處理

將適量的N-Glycosidase F試劑加入到糖基化蛋白質(zhì)樣品中，輕輕混勻。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，確定合適的反應(yīng)溫度和時(shí)間。一般來(lái)說(shuō)，反應(yīng)在37°C下進(jìn)行，時(shí)間可根據(jù)樣品的糖基化程度和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整。

（三）反應(yīng)終止

反應(yīng)結(jié)束后，加入適量的反應(yīng)終止液（如SDS-PAGE上樣緩沖液），將樣品煮沸5 - 10分鐘，使蛋白質(zhì)變性。

（四）后續(xù)分析

將處理后的樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳、免疫印跡、質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)糖基化蛋白質(zhì)的變化情況。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和結(jié)論總結(jié)。

七、注意事項(xiàng)

（一）儲(chǔ)存條件

N-Glycosidase F試劑應(yīng)儲(chǔ)存在?20°C冰箱中，避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致酶活性降低，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在使用前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求將試劑分裝成小份，每次使用一份。

（二）實(shí)驗(yàn)操作

在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，要注意避免酶的污染和失活。使用干凈的移液器和離心管，避免交叉污染。同時(shí)，要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，確保實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性。

（三）安全防護(hù)

N-Glycosidase F是一種生物試劑，具有一定的生物安全性。在操作過(guò)程中，要佩戴實(shí)驗(yàn)手套、口罩等防護(hù)用品，避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，應(yīng)立即用大量清水沖洗，并及時(shí)就醫(yī)。

（四）實(shí)驗(yàn)對(duì)照

為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，應(yīng)設(shè)置合適的實(shí)驗(yàn)對(duì)照。例如，設(shè)置未添加N-Glycosidase F的樣品作為陰性對(duì)照，以排除其他因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

八、性能參數(shù)

九、結(jié)論

Roche 11365177001羅氏試劑N-Glycosidase是一款高效、穩(wěn)定、高純度的糖基化蛋白質(zhì)分析試劑。其高特異性、高活性和高純度等特點(diǎn)，使其在糖基化蛋白質(zhì)分析領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。通過(guò)遵循本用戶指南中的操作流程和注意事項(xiàng)，科研人員可以充分利用該試劑的優(yōu)勢(shì)，開(kāi)展深入的糖基化蛋白質(zhì)研究，為生物醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展做出貢獻(xiàn)。希望本指南能夠幫助用戶更好地使用該產(chǎn)品，取得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。