操作前準備

• 耗材與試劑檢查：確認使用的槍頭、離心管等耗材無 RNA 酶，若有疑慮，可通過查看產(chǎn)品說明或進行 RNA 酶檢測試驗來驗證。同時，檢查試劑盒內(nèi)試劑是否齊全，有無過期、變色、沉淀等異常情況，確保試劑在有效期內(nèi)且保存條件符合要求。

• 儀器設(shè)備檢查：檢查 Qubit 熒光計等儀器設(shè)備是否正常運行，可查看儀器的開機自檢報告，確認光路系統(tǒng)、檢測模塊等提示。并且要確認儀器已按照規(guī)定的周期進行校準，校準記錄完整，以保證儀器檢測的準確性。

操作過程執(zhí)行

• 樣本處理環(huán)節(jié)

• 樣本量準確性：查看吸取樣本的體積是否準確，可通過檢查移液器的設(shè)定值與實際吸取量是否一致來驗證，如使用移液器校準器進行校準驗證。對于 RNA 樣本的稀釋，要檢查稀釋倍數(shù)是否準確，計算過程是否正確。

• 操作手法規(guī)范性：觀察在樣本轉(zhuǎn)移、混合等操作過程中，是否避免了劇烈振蕩和過度吹打，以防 RNA 斷裂。同時，要確認在加入試劑和樣本時，是否按照說明書的要求緩慢加入，避免產(chǎn)生氣泡。

• 避免污染措施：檢查實驗人員是否佩戴了干凈的手套、口罩，實驗臺面和儀器是否經(jīng)過 RNA 酶去除處理，操作過程中是否使用了無 RNA 酶的耗材，以防止外源 RNA 酶和雜質(zhì)的污染。

• 試劑使用環(huán)節(jié)

• 試劑平衡與混勻：確認試劑從冰箱取出后是否平衡至室溫，且在使用前是否輕輕混勻。可通過觀察試劑瓶上的標簽是否有未混勻的痕跡，或輕輕搖晃試劑瓶感受試劑的均勻程度來判斷。

• 試劑添加準確性：檢查試劑的添加量是否準確，移液器的使用是否正確，有無漏液、吸液不準確等情況。可以通過檢查移液器的吸頭是否安裝緊密，以及在添加試劑后觀察試劑液面的高度是否與設(shè)定值相符來判斷。

操作后結(jié)果分析

• 結(jié)果重復(fù)性：對同一樣本進行多次測量，查看結(jié)果是否具有良好的重復(fù)性。一般來說，多次測量的 RNA IQ 值和濃度的變異系數(shù)（CV）應(yīng)在合理范圍內(nèi)，如 CV 值小于 10% 通常表示結(jié)果重復(fù)性較好。

• 對照結(jié)果：檢查陽性對照和陰性對照的結(jié)果是否符合預(yù)期。陽性對照的 RNA IQ 值和濃度應(yīng)與已知標準品的數(shù)值相近，陰性對照的檢測結(jié)果應(yīng)接近于零，否則說明實驗存在問題，如試劑污染或操作失誤。

• 與其他方法的一致性：將 Qubit RNA IQ Assay Kit 的檢測結(jié)果與其他可靠的 RNA 定量或質(zhì)量評估方法（如紫外分光光度法、瓊脂糖凝膠電泳等）的結(jié)果進行比較，若結(jié)果一致或相近，則說明實驗操作可能是規(guī)范的；若結(jié)果差異較大，需仔細分析原因，可能是實驗操作不規(guī)范，也可能是樣本本身的問題或儀器故障。